Mouse visceral tissue samples are ground to extract nucleic acids and microorganisms

 行業資訊    |      2017.12.29    |      Mouse visceral tissue samples are ground to extract nucleic acids and microorganisms

近期的組織研磨和樣品處理分享、討論,我們邀請到了實驗動物監測所老師給大家分享,內容是——小鼠內臟組織樣品研磨提取核酸、微生物,研磨使用的儀器是洛尚(LAWSON)組織研磨儀。 實例1:加裂解液直接勻漿

1、取適量組織裝入離心管,組織盡量剪碎成小塊;

2、在離心管中加入氧化鋯珠數顆(一次性使用);

3、先加入Trizol(不建議加入太多 Trizol,液體體積過大影響勻漿效果),蓋好管蓋,裝入洛尚(LAWSON)組織研磨儀適配器中,安裝上機。

4、組織研磨儀研磨參數設置為一定轉速,研磨時間為2~5min(不同組織研磨時間不同,腦1min,肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min,可能更長,中間應停頓1~2次防止溫度過高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預冷);

5、再加入適量Trizol至總體積;

6、后面步驟按Trizol說明進行。

實例2:先勻漿,再取一定量液體加裂解液進行核酸抽提,本protocol適用提取小鼠組織中的病毒的核酸

1、取適量組織裝入離心管,組織盡量剪碎成小塊,樣品量較多時使用大離心管;

2、在離心管中加入氧化鋯珠數顆,使用大離心管時,可以將氧化鋯珠數量增加;

3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水,總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好,蓋好管蓋,裝入洛尚(LAWSON)組織研磨儀適配器中,安裝上機(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預冷)。

4、洛尚(LAWSON)組織研磨儀參數設置為一定轉速,研磨時間為1~5min(不同組織研磨時間不同,腦1min,肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min,可能更長,中間應停頓1~2次防止溫度過高),若研磨不充分,可以繼續研磨到充分為止;

5、一定溫度、轉速,離心數分鐘;

6、取上清液按照試劑盒說明書進行后續提取步驟。 實驗1中,我們之前試過一齊加1ml的Trizol,可能是體積過大,反而勻漿效果不好,所以就改成先加一部分裂解先勻漿,然后再補齊1ml體積。